玻璃化冷冻和程序化冷冻方法保存猕猴卵巢组织的存活效果比较

摘要

目的探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对猕猴卵巢组织的冷冻保存效果。方法取新鲜的猕猴卵巢组织随机分成对照组（新鲜卵巢组织）、玻璃化冷冻组和程序化冷冻组,分别进行HE染色、窦前卵泡的分类计数及免疫染色,比较3组卵巢组织内卵泡形态学、各级卵泡正常率及磷酸化组蛋白H3（PHH3）的表达量的差异。结果①HE染色:3组中,始基卵泡、初级卵泡正常率差异均无统计学意义（P均＆0.05）;程序化冷冻组单层次级卵泡正常率[40.6%（28/69）]均低于玻璃化冷冻组[53.5%（38/71）]、对照组[60.7%（34/56）],3组间差异有统计学意义（P=0.044）,但玻璃化冷冻组、对照组间差异无统计学意义（P＆0.05）;玻璃化冷冻组、程序化冷冻组多层次级卵泡正常率[23.4%（11/47）,16.7%（7/42）]均明显低于对照组[57.3%（39/68）]（P均＆0.001）,玻璃化冷冻组多层次级卵泡正常率高于程序化冷冻组,但差异无统计学意义（P＆0.05）。②分离卵泡比较:玻璃化冷冻组、程序化冷冻组初级卵泡正常形态率均接近对照组,差异无统计学意义（P＆0.05）;玻璃化冷冻组和程序化冷冻组次级卵泡正常率[38.2%（34/89）,23.7%（23/97）]明显较低,与对照组[56.4%（61/108）]比较差异均有统计学意义（P均＆0.001）;玻璃化冷冻组的次级卵泡正常形态率明显高于程序化冷冻组,差异有统计学意义（P＆0.001）;③ PHH3染色:玻璃化冷冻组颗粒细胞PPH3的阳性表达率接近对照组（P＆0.05）,程序化冷冻组卵泡颗粒细胞PHH3阳性表达率（58.72%±12.31%）明显低于对照组（67.58%±8.45%,P=0.04）和玻璃化冷冻组（62.87%±9.94%,P=0.03）。结论玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存卵巢组织,但玻璃化冷冻对卵巢组织冷冻和复融过程中各级卵泡及颗粒细胞形态学的损伤明显低于程序化冷冻,更适合下一步人类卵巢组织的冷冻保存的研究。