以细胞筛为载体的玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻保存人卵巢组织的效果比较

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分
　　女性肿瘤患者接受肿瘤相关治疗后可能丧失生育功能。一些良性疾病患者，如有卵巢早衰风险、需要进行化疗的自身免疫疾病、需要骨髓移植的疾病等，也有生育力保存的需求。胚胎冷冻、卵母细胞冷冻、卵巢冷冻等都是生育力保存的方法。与发展较为成熟的胚胎冷冻相比，卵巢冷冻仍处于实验阶段。卵巢冷冻主要由两种冷冻方法，玻璃化冷冻和慢速冷冻，目前卵巢组织冷冻复苏再移植活产的报道使用的冷冻方法都是慢速冷冻。玻璃化冷冻在胚胎冻存上已取代了慢速冷冻，但二者保存卵巢组织的效果孰优孰劣仍有争议，可能在于玻璃化冷冻的载体选择。冷冻过程使用的载体系统能否达到形成玻璃化的降温速度是决定玻璃化冷冻效果的重要因素。细胞筛是用于细胞培养、杂质过滤、细胞分散的工具，主要材质为聚丙乙烯，孔径为100μm，可使液氮和冷冻保护剂迅速渗透，有望作为玻璃化冷冻的良好载体。
　　目的:比较以细胞筛为载体的玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻用于人卵巢组织冷冻的效果。
　　方法:人卵巢组织取皮质切块后，随机分为3组:新鲜组织对照组（F组）、慢速程序化冷冻组（S组）及以细胞筛为载体玻璃化冷冻组（V组）。卵巢组织冷冻复苏后，固定切片后行苏木素-伊红染色，观察卵泡形态;使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术，观察卵泡凋亡情况;采用免疫组化方法观察三组IGF1-R表达情况。比较三组卵泡正常形态率、卵泡凋亡率、IGF1-R阳性面积比。部分卵巢组织体外培养，隔日采集培养液后检测雌二醇(E2)浓度;比较三组及E2浓度。V组和S组复苏后卵巢组织各选6只去势雌裸鼠进行异体移植，另以6只去势雌裸鼠作为对照组，移植后饲养1月，比较三组小鼠血清E2浓度。
　　结果:与F组原始卵泡正常形态率(91.1％)相比，V组原始卵泡正常形态率(88.1％)无显著差异(P＞0.05)，而S组原始卵泡正常形态率(79.6％)显著下降(P＜0.001);V组初级卵泡正常形态率(74.2％)与S组(73.6％)相似，但两组均低于F组(89.0％)(P＜0.05);凋亡检测中，三组凋亡率无显著差异(P＞0.05); IGF1-R在三组原始卵泡和初级卵泡的颗粒细胞中均有表达，三组阳性面积比无显著差异(P＞0.05)。体外培养2周后，各组E2浓度持续上升，F组E2浓度显著高于S组、V组(P＜0.001)，后二组E2浓度无显著差异(P＞0.05)。异体移植后，S组、V组裸鼠血清E2浓度显著高于去势对照组(P＜0.05)，但两组间无显著差异(P＞0.05)。
　　结论:以细胞筛为载体的玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻均能较好地保存人卵巢组织卵泡的形态和内分泌功能，前者对原始卵泡的保存效果更佳;复苏后组织体外培养和异体移植后后，还可持续分泌E2; IGF1-R可在卵巢组织的原始卵泡和初级卵泡的颗粒细胞上表达，冷冻并不会损伤IGF1-R的免疫活性。
　　第二部分
　　目的:观察Implanon皮下埋置避孕剂植入后出现的出血模式改变及副作用。
　　方法:纳入有避孕需求的妇女45例，签署知情同意书后植入皮下埋置避孕剂。以90 d为一个观察期，观察避孕效果、出血模式改变和副作用。随访4个观察期。记录出血模式、痛经、体重、痤疮及其他不良反应。
　　结果:在观察期内，无意外妊娠发生。第1个观察期末，患者平均出血天数为28.2 d，平均出血次数为3.2次。频繁出血和/或出血时间延长、出血次数减少、出血次数正常、闭经者分别占40％、35.6％、35.6％和11.1％。随着使用时间的延长，在第4个观察期末，平均出血天数降至17.3 d，平均出血次数为2.3次。频繁出血和/或出血时间延长、出血次数减少、出血次数正常和闭经者分别占11.1％、41.7％、38.9％和13.9％。使用1年后，82.4％的患者痛经完全缓解或程度减轻。使用皮埋剂后患者的平均体重[(60.5±9.8)kg]显著高于放置前[(58.0±9.9)kg](P＜0.01)，平均增加了(2.5±3.3) kg。其他不良反应较少，1例出现痤疮，2例出现情绪改变，1例出现嗜睡症状。
　　结论:Implanon植入1年避孕有效（有效率100％）。其最主要的副作用是出血模式的改变，但出血时间延长和/或频繁出血会随着植入时间的延长逐渐改善。Implanon能有效缓解痛经，但使用后体重有所增加，其他不良反应较少。

目录

中英文缩略词表

前言

第一部分

摘要

引言

实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分

摘要

引言

资料与方法

结果

讨论

参考文献

综述 女性生育力保存进展

博士在读期间发表的论文

致谢

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