组织培养观察胎牛血清和血清替代物——KnockoutTM SR对大鼠未成熟睾丸生殖细胞发育的影响

摘要

目的:比较胎牛血清(FBS)和血清替代物——KnockoutTM SR(KSR)对睾丸组织生长发育的影响.方法:未成熟大鼠睾丸组织分别采用FBS和KSR连续培养5周,观测培养睾丸组织大体面积,苏木素伊红(HE)染色观察睾丸组织学形态及生殖细胞发育,并测量曲细精管直径.TUNEL法凋亡实验观察培养5周睾丸组织中的凋亡细胞,RT-PCR检测精子发生不同阶段的标准化标志基因Kit、Sycp3、Crisp1.结果:KSR组睾丸组织体外持续生长,曲细精管逐渐增大,培养5周观察到精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、圆形精子细胞,RT-PCR检测到Kit,Sycp3、Crisp1的表达.FBS组睾丸组织随着培养时间延长逐渐萎缩,培养5周曲细精管出现明显坏死,培养睾丸组织中Sycp3、Crisp1表达不稳定.结论:KSR更有利于未成熟睾丸组织培养中生殖细胞从精原细胞发育成精子细胞,并能长期维持生殖细胞发育及睾丸组织生长.