薯蓣皂苷对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

摘要

目的探讨薯蓣皂苷(Dio)对高糖(HG)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的保护作用,并分析其机制。方法用细胞计数试剂8(CCK-8)法筛选葡萄糖浓度和无细胞毒性的Dio剂量范围。将ARPE-19细胞分为对照组(5 mmol·L^(-1)葡萄糖处理48 h)、模型组(50 mmol·L^(-1)葡萄糖处理48 h)和低、中、高剂量Dio处理组(分别用50 mmol·L^(-1)葡萄糖联合0.5 mmol·L^(-1)、2.0 mmol·L^(-1)和8.0 mmol·L^(-1) Dio处理48 h)。CCK-8法检测细胞活性;FITC标记膜联蛋白-V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色检测细胞凋亡;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;试剂盒法检测丙二醛(MDA)水平、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;JC-1染色检测线粒体膜电位;Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved Caspase-3和Yes相关蛋白(YAP)的表达水平;免疫荧光法观察YAP的表达。结果筛选的葡萄糖浓度为50 mmol·L^(-1),Dio的无细胞毒性的剂量为0.5 mmol·L^(-1)、2.0 mmol·L^(-1)、8.0 mmol·L^(-1)。与对照组比较,模型组细胞活性、线粒体膜电位、CAT和GSH-Px活性以及Bcl-2蛋白和YAP蛋白表达水平均明显降低(均为P<0.001),细胞凋亡水平、ROS和MDA水平以及cleaved Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达水平均明显升高(均为P<0.001);与模型组比较,低、中、高剂量Dio处理组细胞活性、线粒体膜电位、CAT和GSH-Px活性以及Bcl-2蛋白和YAP蛋白表达水平均明显升高(均为P<0.05),细胞凋亡水平、ROS和MDA水平以及cleaved Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达水平均明显降低,且均呈剂量依赖性(均为P<0.05)。结论Dio可通过激活YAP信号,降低氧化应激反应和抑制线粒体介导的细胞凋亡途径,进而减轻HG诱导的RPE细胞损伤。