木犀草素对人脉络膜黑色素瘤细胞株C918血管生成拟态形成的影响

摘要

目的 探讨木犀草素对人脉络膜黑色素瘤细胞株C918血管生成拟态形成的影响及其可能的分子机制.方法 体外培养C918细胞,木犀草素0μmol·L-1、0.10μmol·L-1、6.25μmol·L-1、12.50μmol·L-1、25.00μmol·L-1、50.00μmol·L-1、100.00μmol·L-1、200.00μmol·L-1、400.00μmol·L-1作用细胞12 h、24 h后,CCK-8法测定光密度值,通过GraphPad Prism软件拟合量效曲线.根据IC50值及实验目的,确定分组为对照组(木犀草素0μmol·L-1组)、木犀草素12.50μmol·L-1组、木犀草素25.00μmol·L-1组、木犀草素50.00μmol·L-1组.应用划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移、侵袭能力.在Matrigel基质胶上三维培养C918细胞并行PAS染色,显微镜下观察各组细胞血管生成拟态形成情况.Western blot检测p-PI3KP85、AKT、p-AKT蛋白表达.结果 CCK-8实验结果显示,木犀草素呈浓度依赖性和时间依赖性抑制C918细胞活力,GraphPad Prism软件拟合量效曲线,确定木犀草素作用C918细胞12 h及24 h的IC50值分别为163.70μmol·L-1和51.46μmol·L-1.划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果显示,各浓度木犀草素组细胞迁移速率、侵袭能力均明显低于对照组,差异有统计学意义(均为P0.05);木犀草素25.00μmol·L-1组和木犀草素50.00μmol·L-1组相比,细胞侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05);其余实验组间两两相比细胞迁移速率、侵袭能力差异均有统计学意义(均为P>0.05).显微镜下观察发现,对照组和木犀草素12.50μmol·L-1组C918细胞形成环状结构,且糖原PAS染色阳性,两组之间环状结构数差异无统计学意义(P>0.05);木犀草素25.00μmol·L-1组和木犀草素50.00μmol·L-1组仅有部分细胞形成树枝样结构,无明显环状结构形成.Western blot检测结果显示,各浓度木犀草素组p-PI3K P85、p-AKT蛋白水平均较对照组明显下调,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 木犀草素可能是通过PI3K/AKT信号通路抑制C918细胞血管生成拟态形成的.