N-乙酰-5-羟色胺对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血-再灌注损伤(retina ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响.方法 取健康成年Sprague Dawley大鼠54只,将大鼠随机分为正常组(6只)、RIRI组(24只)与NAS组(24只);采用高眼压法建立大鼠RIRI模型,依据造模后不同时间点将RIRI组与NAS组大鼠又分为6h、12 h、24h及72 h四个亚组.NAS组于造模前30 min腹腔注射NAS(5 mg·kg-1),RIRI组腹腔注射等剂量的生理盐水.通过HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠视网膜形态学变化,并记录各组大鼠视网膜厚度及视网膜神经节细胞数,采用免疫组织化学染色法检测NAS对RIRI大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响.结果 HE染色显示,正常组大鼠视网膜各层细胞分界清晰,形态正常,神经细胞排列整齐;RIRI组大鼠再灌注后6h视网膜各层出现水肿,以神经节细胞层及内核层较显著,神经节细胞数较正常组减少;随后视网膜水肿进一步加重,神经节细胞继续减少;NAS组大鼠在再灌注后6h、12 h、24h视网膜水肿程度较RIRI组轻,NAS组在再灌注后72 h视网膜厚度较RIRI组厚,NAS组各时间点神经节细胞数均较RIRI组多,差异均有统计学意义(均为P＜O.05).免疫组织化学染色显示,正常组几乎未见Fas+细胞.再灌注后6h,RIRI组视网膜神经节细胞及内核层开始出现少量Fas+细胞;再灌注后12h,RIRI组视网膜Fas+细胞表达逐渐增多;再灌注后24h视网膜Fas+细胞数达到高峰,棕色阳性染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层;再灌注后72 h视网膜Fas+细胞较再灌注后24h减少.NAS组在再灌注后6h、12 h、24h、72 h视网膜Fas+细胞数均较RIRI组各时间点减少,再灌注后24h,Fas+细胞数达较高水平,随后下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常组视网膜可见FasL全层低表达.RIRI组再灌注后6h,视网膜神经节细胞层和神经纤维层存在少量FasL+细胞;再灌注后12 h FasL蛋白表达逐渐增多;再灌注后24 hFasL+细胞数达高峰,可见深棕色的细胞膜及细胞质染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层;再灌注后72 hFasL蛋白的阳性表达逐渐减少.NAS组再灌注后6h、12 h、24h、72 h视网膜FasL+细胞数均少于RIRI组各时间点阳性细胞数,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可通过抑制RIRI大鼠视网膜细胞Fas、FasL蛋白的表达,减轻缺血再灌注对大鼠视网膜细胞造成的损伤.