tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达

摘要

目的观察组织型谷氨酰胺转移酶 (tissue transglutaminase,tTG) 硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,ASODN) 对体外培养牛眼小梁细胞 (bovine trabecular meshwork cell,BTMC) tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性.方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化.结果 ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.069 5±0.000 9、1.066 2±0.000 7,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.018 5±0.002 4、1.016 7±0.001 2;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异( P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN2 2组间无显著性差异( P>0.05).结论 tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用.