角膜基质细胞条件培养液促进角膜内皮细胞增生的研究

摘要

目的 探讨人胚胎角膜基质细胞(human embryonic C01Tleal stromal cells,hECSC)条件培养液对人胚胎角膜内皮细胞(human embryonic corneal endothelial cells,hECEC)体外增生的影响.方法 将生长融合达80%的原代hECEC用0.125 g·L-1胰蛋白酶/0.53 mmol·L-1EDTA传代5～10 min,第1代分3组接种于96孔板,第2天分别加入DMEM/F12(含体积分数10%FBS)、DMEM/F12(含体积分数15%FBS)和hECSC条件培养液;MTT法检测细胞增生情况;免疫荧光法对hECEC进行初步鉴定;BCA蛋白定量试剂盒检测hECSC条件培养液中蛋白含量;SPSS 11.5软件包对数据进行统计学分析.结果 MTT法检测DMEM/F12含10%FBS、DMEM/F12含15%FBS和hECSC条件培养液培养的A值分别为0.111 67±0.004 10、0.110 13±0.003 17、0.122 53±0.004 10,多组方差分析显示,条件培养液组与其他2组相比差异均有统计学意义(P均<0.05);免疫荧光结果显示hECSC呈NSE和ZO-1阳性染色;BCA蛋白定量结果显示hECSC条件培养液中总蛋白浓度为871.385 mg·L-1.结论 hECSC条件培养液对hECEC的体外生长增生有促进作用,其应用和其中活性成分分析有待进一步的研究.