负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物在兔角膜移植中的研究

摘要

目的 观察负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物,在行板层角膜移植术后角膜的愈合情况,评价其作为角膜移植替代物的可行性.方法 选用健康成年大耳白兔105只,随机分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组各30只,Ⅰ组、Ⅱ组分别行板层植入胶原基复合角膜替代物、负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物;Ⅲ组为同种异体对照组.各组根据不同处死时间随机分为3d、7d、15 d、1个月、3个月、6个月组,每组各5只.其余15只(30眼)作为Ⅲ组角膜移植供体来源.术后行裂隙灯显微镜观察角膜透明度与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)评分情况,行HE染色以及上皮细胞标志蛋白K3和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的免疫组织化学检测.采用Friedman秩和检验行组间比较,组内两两比较采用Wilcoxon符号秩和检验.结果 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后角膜透明度逐渐升高(P1 =0.000、P2=0.000、P3 =0.006).术后3d、7d、3个月,Ⅰ组和Ⅲ组角膜透明度评分差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.022);术后7d,Ⅰ组和Ⅱ组角膜透明度评分差异有统计学意义(P =0.037).术后三组角膜CNV评分随时间延长逐渐升高,至术后15 d达最高,后逐渐降低(P1=0.001、P2=0.001、P3=0.000).术后3d、7d、15 d,Ⅰ组和Ⅲ组CNV评分差异有统计学意义(P=0.041、0.000、0.024);术后7d,Ⅰ组和Ⅱ组CNV评分差异有统计学意义(P=0.011).组织学观察结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组术后1个月移植材料几乎完全降解,角膜基质胶原排列趋于规则,Ⅲ组胶原纤维排列局部欠规则;术后6个月三组胶原纤维排列基本规则.免疫组织化学检测结果显示:术后6个月,三组角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3阳性表达.术后6个月VEGF表达较术后15 d减少,Ⅲ组较Ⅰ组、Ⅱ组表达减少.结论 胶原基复合角膜替代物能支持角膜上皮的生长,促进角膜基质的改建,抑制CNV生成,进一步改进后有望成为新型的板层角膜移植支架材料.