miR-223-3p调控NLRP3炎症小体对自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响

摘要

目的探讨miR-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。方法首先构建双荧光素酶报告质粒载体,并验证miR-223-3p对NLRP3基因表达的调控作用。然后将48只健康Lewis雌性大鼠随机分为正常对照(NC)组、EAU组和miR-223-3p慢病毒组,每组16只。EAU组和miR-223-3p慢病毒组大鼠首先用光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)乳糜液诱导EAU模型,同时miR-223-3p慢病毒组每只大鼠双眼玻璃体内注射8μL携带miR-223-3p的慢病毒,造模12 d后麻醉处死大鼠,分离各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织。实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p、NLRP3、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)的基因表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)以及NLRP3的蛋白表达水平;流式细胞仪检测各组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中M1、M2型巨噬细胞水平。结果双荧光素酶表达报告系统检测证实NLRP3是miR-223-3p调控的靶基因。与NC组相比,造模12 d后,EAU组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中miR-223-3p的表达水平均降低(均为P<0.05),而NLRP3和iNOS的mRNA表达水平均升高(均为P<0.05),M1型巨噬细胞相关因子iNOS mRNA和TNF-α蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),而M2型巨噬细胞相关因子Arg-1 mRNA和IL-10蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与EAU组相比,造模12 d后,miR-223-3p慢病毒组大鼠眼、脾脏和淋巴结组织中NLRP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,iNOS mRNA和TNF-α蛋白表达水平均降低,而Arg-1 mRNA和IL-10蛋白表达水平均升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与NC组相比,造模12 d后,EAU组大鼠M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低,M1/M2巨噬细胞比例升高(均为P<0.05);与EAU组相比,造模12 d后,miR-223-3p慢病毒组大鼠M1型巨噬细胞极化水平降低,而M2型巨噬细胞极化水平升高,M1/M2巨噬细胞比例逐渐恢复平衡(均为P<0.05)。结论EAU大鼠体内巨噬细胞极化失衡,提高miR-223-3p水平可抑制NLRP3炎症小体的表达,进而抑制炎症相关信号通路,降低M1型巨噬细胞极化水平以及提高M2型巨噬细胞极化水平,从而发挥对葡萄膜炎大鼠巨噬细胞极化平衡的调控作用。