小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为建立一种特异、灵敏、量化且耗时短的小反刍兽疫病毒(PPRV)检测方法,通过设计一对PPRV N基因的引物,建立检测PPRV的Eva Green实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)的检测方法,对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行分析,并用建立的方法对临床疑似PPRV样品进行检测.结果显示,所建立的检测PPRV RT-qPCR方法标准曲线具有良好的线性关系(R2=0.999);与羊口疮病毒(ORFV)、山羊痘病毒(GTPV)、羊流产嗜性衣原体(Goat Chlamydophila abortus)无交叉反应,特异性强;相比常规RT-PCR检测方法灵敏度高出100倍;重复试验变异系数系数在1％ 以下,重复性良好.对16份临床样品提取的RNA检测结果显示,该方法与常规RT-PCR检测结果一致.建立的RT-qPCR检测方法可用于临床PPRV的检测.