禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株衣壳蛋白基因原核表达及其ELISA检测研究

摘要

利用RT-PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因,分别插入pGEX-4T-1原核表达载体,转化到E.coli ER2566表达菌内,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表达产物.结果表明,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为53,53,56ku.以电洗脱法纯化VP0、VP3、VP1表达蛋白抗原并分别建立了间接ELISA方法,用阳性血清和阴性血清进行检测.结果显示,表达VP1蛋白反应活性相对高于VP0、VP3蛋白反应活性,最后再将自制VP1板用自配试剂检测其活性,同时用美国试剂盒检测VP1活性,美国ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样10份血清作比较,三组ELISA检测结果,其中有8份被检血清为阳性;2份被检血清为阴性.这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致.说明VP1表达蛋白活性达到预期要求,可以用做AE的ELISA诊断.