淋球菌孔蛋白基因与脂寡糖表位融合基因原核表达载体的构建及表达

摘要

PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GSGGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆栽体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)中,构建pET32a-PIA-表位、pET32aPIB-表位、pET32a-PIA和pET32a-PIB重组表达质粒,PCR、双酶切鉴定及测序正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经SDS-PAGE鉴定分析,成功表达融合蛋白.