基因融合

摘要： 目的探讨类似于卵巢性索间质肿瘤的子宫肿瘤的临床病理特点、诊断进展。方法回顾性分析郑州大学第三附属医院2020年4月至2021年5月收治的2例类似于卵巢性索间质肿瘤的子宫肿瘤(UTROSCT)患者临床病理资料,复习已发表文献并整理分析。结果2例患者均因异常子宫出血就诊,术前超声检查均可疑子宫黏膜下肌瘤。患者1经宫腔镜检查电切除肿瘤后病理诊断为UTROSCT,再次手术行腹腔镜下全子宫及双侧输卵管切除术,随访14个月未见复发;患者2直接行腹腔镜下全子宫及双侧输卵管切除术,病理诊断为UTROSCT,随访2个月未见复发。查阅国内外文献,截至投稿之日UTROSCT已报道病例少于100例,患者常因异常子宫出血就诊,可有腹痛,检查常可发现子宫增大,影像学提示子宫内膜息肉样或平滑肌瘤样改变,经宫腔镜局部切除或子宫切除手术发现,也有按照子宫肌瘤行手术剥除后病理提示为该病。治疗以手术为主,对于有生育要求的女性,可行保守性手术仅切除肿瘤;对于无生育要求的未绝经女性,可行全子宫及双侧输卵管切除,保留双侧卵巢;对于绝经后女性,可行子宫全切和双侧输卵管卵巢切除术。已证实UTROSCT的分子生物学特征常伴乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)和雌激素受体1(ESR1)融合,不同的基因融合可能预示不同的转移复发风险。结论UTROSCT是一种罕见的恶性潜能未定的肿瘤,临床表现、辅助检查结果均无特异性,容易误诊,需依靠病理确诊,目前治疗手段主要为手术治疗;基因水平的检测及研究将在该病诊断、治疗中起到重要作用。

摘要： 原肌球蛋白受体激酶(tropomyosin receptor kinase,TRK)蛋白家族由神经营养性酪氨酸受体激酶(neurotrophic tyrosine receptor kinase,NTRK)基因编码,在胚胎发育和神经系统正常功能的维持中发挥作用。已在多种成人和儿童实体瘤中确定NTRK基因融合为致癌驱动因子。NTRK基因重排和融合转录可通过不同的分子病理学技术检出,这些筛查技术为确定最可能从靶向TRK融合治疗中获益的患者提供支持。本文概述了NTRK基因融合的发生机制和特征,NTRK基因融合检测方法和检测路径,以及TRK抑制剂的治疗获益和研究进展,总结了TRK融合癌的多国共识和指南,旨在帮助临床医生了解如何和何时进行NTRK基因融合检测,以及针对TRK融合癌的靶向治疗现状,从而更好地指导患者治疗。

摘要： 为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白,试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌(E.coli)OmpA蛋白基因进行融合,采用柔性linker联接,得到OmpA-linker-PEDV N融合基因,并克隆至pCold I质粒,构建重组质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N。重组质粒转入BL21感受态细胞,SDS-PAGE分析重组质粒的表达,并对其编码的融合蛋白进行二级和三级结构预测。Western-blot和ELISA分析融合蛋白的免疫原性。结果表明:构建了融合基因表达质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N,表达了约88 ku的融合蛋白;融合蛋白的二级结构未发生明显变化,三级结构预测可折叠为正确的空间构像。该融合蛋白同时具有PEDV N蛋白和OmpA蛋白的免疫原性,并且其免疫原性显著高于单一PEDV N蛋白。说明试验获得了免疫原性较好的融合基因表达蛋白,可以为PEDV N蛋白功能研究、特异性抗体制备以及PEDV亚单位疫苗的研制提供材料和研究基础。

摘要： 神经营养因子酪氨酸受体激酶(NTRK)基因融合于1986年在结直肠癌中首次被发现,这种致癌的NTRK基因融合已经被发现存在于多种不同组织学类型的成人和儿童肿瘤中。NTRK基因融合为靶向治疗提供了新的靶点,目前针对该种基因突变的不限年龄、不限肿瘤类型的广谱抗癌药Larotrectinib和Enrectinib也已经在美国、日本、欧洲地区批准上市。本文将从原肌球蛋白受体激酶(TRK)蛋白的生理与功能、NTRK基因融合与肿瘤发生、NTRK基因融合的检测、NTRK基因融合的靶向治疗4个方面进行梳理阐述。

摘要： 融合基因是由2个或者2个以上不同的基因融合形成的一种基因产物,在基因组中普遍存在。部分基因融合的产生与多种癌症的发生发展密切相关,其在白血病、胃癌、肺癌和前列腺癌等癌症中通过调控激酶活性及表观遗传修饰等多种方式异常调节相关基因的表达,被广泛应用于癌症的诊断和预后分析,是癌症治疗的潜在靶点。现就染色体重排产生的融合基因与癌症发生发展的相关性及其具体致病机制的最新研究进展进行综述,为研究基因融合在恶性肿瘤中新的发生机制提供思路,为开展有效的临床治疗提供新的理论指导。

摘要： 【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E0和E2串联基因重组腺病毒作为基因工程疫苗的应用潜力。【方法】采用PCR扩增、E0-E2基因融合并构建重组穿梭质粒pDC316-E0-E2,将其与AdMax腺病毒系统的骨架质粒共转染HEK293T细胞包装成重组腺病毒,通过Western blotting进行验证,并通过Reed-Muench法测定病毒滴度,通过肌内、皮下免疫接种小鼠后用ELISA方法及流式细胞检测进行免疫效果试验。【结果】成功扩增到E0、E2基因目的片段,大小分别为681和1122 bp,得到了完整的腺病毒Ad5-E0-E2;测定其滴度为1.1×10^(10) PFU/mL;Western blotting检测结果显示,Ad5-E0-E2外源基因在HEK293T细胞中表达,得到了与预期相符的目的条带(65 ku);ELISA检测结果表明,通过肌内和皮下注射Ad5-E0-E2均能产生较高的抗体水平;流式细胞检测显示首免、二免后肌内和皮下注射Ad5-E0-E2组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值均极显著高于PBS对照组(P<0.01)。【结论】本试验成功构建重组腺病毒Ad5-E0-E2,且具有较好的反应原性和免疫原性,能诱导机体产生针对BVDV的特异性抗体。

摘要： 用于实验室检查前列腺癌(prostate cancer,PCa)的前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)已无法满足临床的需求,目前急需新型的前列腺癌标志物来诊断和检测前列腺癌的发生、发展和预后。随着研究的深入众多,新型前列腺癌标志物在不同方面都体现了各自的优势,同时又存在其不足。该文通过广泛查阅最新的资料,比较各个指标的诊断效能、优缺点及目前临床应用的情况,探讨前列腺癌实验室诊断的最新进展,寻找能够加强前列腺癌的诊断效能的新方法,以期为患者提供更加高效的治疗手段。

摘要： 肺癌是我国最常见且死亡率最高的恶性肿瘤之一,随着表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)及活性氧1(ROS1)等驱动基因及其相应分子靶向药物的出现,晚期非小细胞肺癌的治疗和预后发生了革命性变化。此外,一些少见新型驱动基因融合,包括神经调节蛋白1(NRG1)、神经营养酪氨酸受体激酶(NTRK)和转染重排因子(RET),正逐渐发展成为全身性治疗选择。然而,这些罕见新型融合驱动基因在NSCLC脑转移中的作用机制,以及优化控制和预防脑转移的意义人们所知甚少。因此,本文就近几年罕见驱动基因融合在NSCLC脑转移中的研究进行综述。

摘要： TFE3相关基因融合可见于肾细胞癌和腺泡状软组织肉瘤及伴TFE3重排的血管周上皮样细胞肿瘤(PEComa)样的间叶性肿瘤,而在间叶性肿瘤中,以往仅ASPSCR1-TFE3基因融合在腺泡状软组织肉瘤中被报道。作者报道3例具有ASPSCR1-TFE3基因融合的、少见的间叶性肿瘤,患者均为女性,年龄18~64岁,分别位于肾脏、膀胱和子宫。

摘要： 蕈样肉芽肿是原发皮肤T细胞淋巴瘤中最常见的类型,其发病机制仍然不清楚.研究显示,蕈样肉芽肿存在高频染色体片段拷贝数变异,如染色体7q、1q、17q的扩增和9p21、10q、17p的缺失,导致相应区域上原癌基因扩增和抑癌基因丢失,从而促进肿瘤的发生发展.同时蕈样肉芽肿中存在低频单核苷酸变异,这些变异基因主要集中在细胞周期调控、细胞凋亡、染色质重塑以及T细胞活化相关的通路上.蕈样肉芽肿很少有发生基因融合变异的报道.另外,部分蕈样肉芽肿病例会发生大细胞转化,往往预示疾病进展及药物抵抗等不良预后.总之,蕈样肉芽肿是一种具有高度分子遗传学异质性的复杂疾病,未来还需要更广泛深入的机制研究.

摘要： 为构建携TRAIL和HN基因的重组腺病毒载体,采用RT-PCR分别扩增出TRAIL和HN基因,建立TRAIL-2A-HN连接,将目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:RT-PCR、荧光显微镜检测证实重组腺病毒质粒成功导入AD293细胞中且具有良好的感染性,病毒滴度达到108TCID50/mL.结论:成功构建了重组腺病毒载体系统,为下一步研究其对马立克氏病肿瘤细胞的抑制作用建立基础.

摘要： 本研究选择了具有肿瘤靶向作用的生长抑素类似物奥曲肽，运用基因工程手段与肠毒素C2突变体和葡激酶的基因融合，拟构建一种全新的生长抑素受体靶向融合蛋白，以期为扩大超抗原肽在临床上的应用和新型抗肿瘤生物制剂的研制奠定工作基础。

摘要： 构建了共表达HN基因和ChMIL-18基因的重组表达载体pPICZαA-HN-ChMIL18,对其进行诱导表达并对其活性进行了检测。

摘要： 在机体内，正常生理浓度的活性氧(ROS)是维持正常细胞生理功能所必需的，而过量的ROS则会对各种生物分子，诸如：蛋白质，脂类(包括脂蛋白)、DNA等，造成损伤。本文从已有的酶模型出发，在SOD和GPX小肽模拟酶的基础上，在蛋白质二级结构预测软件的辅助下，设计了具有SOD和GPX活性的小肽双功能模拟酶。同时，利用基因融合技术，又进一步构建了兼具SOD、GPX和GST活力并可协同作用的三功能抗氧化酶模型。

摘要： 本实验将球虫子孢子折光体抗原SO7基因与DCpep融合克隆到穿梭表达载体pSIP-409中,转化至大肠杆菌中,再将其电转化进入乳酸菌,构建重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep.Western blotting检测表达产物的反应原性.最后应用重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep免疫雏鸡2周,同时设置对照组.实验结果表明SO7和SO7-DCpep基因在植物乳杆菌NC8中成功表达.pS-IP-409-SO7、pSIP-409-SO7-DCpep重组乳酸菌的动物实验表明,与对照组相比,免疫组鸡临床症状不明显,增重效果明显,盲肠病变显著减轻,盲肠病变计分差异显著(P＜0.01),OPG计数显著降低(P＜0.01).各组雏鸡血清中IgG抗体水平表明,SO7-DCpep组与其他各组相比,血清中IgG水平增加,差异显著(P＜0.05),免疫保护率为86％.本研究成功构建了成功构建穿梭表达载体pSIP-409-SO7-DCpep且融合外源基因在乳酸菌中正确表达.动物试验表明本试验构建的重组乳酸菌可有效抵抗球虫卵囊攻击,具有较好的保护效果.本研究为球虫新型疫苗的开发开辟了新思路.

摘要： 本实验将球虫子孢子折光体抗原SO7基因与DCpep融合克隆到穿梭表达载体pSIP-409中,转化至大肠杆菌中,再将其电转化进入乳酸菌,构建重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep.Western blotting检测表达产物的反应原性.最后应用重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep免疫雏鸡2周,同时设置对照组.实验结果表明SO7和SO7-DCpep基因在植物乳杆菌NC8中成功表达.pS-IP-409-SO7、pSIP-409-SO7-DCpep重组乳酸菌的动物实验表明,与对照组相比,免疫组鸡临床症状不明显,增重效果明显,盲肠病变显著减轻,盲肠病变计分差异显著(P＜0.01),OPG计数显著降低(P＜0.01).各组雏鸡血清中IgG抗体水平表明,SO7-DCpep组与其他各组相比,血清中IgG水平增加,差异显著(P＜0.05),免疫保护率为86％.本研究成功构建了成功构建穿梭表达载体pSIP-409-SO7-DCpep且融合外源基因在乳酸菌中正确表达.动物试验表明本试验构建的重组乳酸菌可有效抵抗球虫卵囊攻击,具有较好的保护效果.本研究为球虫新型疫苗的开发开辟了新思路.

摘要： 本实验将球虫子孢子折光体抗原SO7基因与DCpep融合克隆到穿梭表达载体pSIP-409中,转化至大肠杆菌中,再将其电转化进入乳酸菌,构建重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep.Western blotting检测表达产物的反应原性.最后应用重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep免疫雏鸡2周,同时设置对照组.实验结果表明SO7和SO7-DCpep基因在植物乳杆菌NC8中成功表达.pS-IP-409-SO7、pSIP-409-SO7-DCpep重组乳酸菌的动物实验表明,与对照组相比,免疫组鸡临床症状不明显,增重效果明显,盲肠病变显著减轻,盲肠病变计分差异显著(P＜0.01),OPG计数显著降低(P＜0.01).各组雏鸡血清中IgG抗体水平表明,SO7-DCpep组与其他各组相比,血清中IgG水平增加,差异显著(P＜0.05),免疫保护率为86％.本研究成功构建了成功构建穿梭表达载体pSIP-409-SO7-DCpep且融合外源基因在乳酸菌中正确表达.动物试验表明本试验构建的重组乳酸菌可有效抵抗球虫卵囊攻击,具有较好的保护效果.本研究为球虫新型疫苗的开发开辟了新思路.

摘要： 本实验将球虫子孢子折光体抗原SO7基因与DCpep融合克隆到穿梭表达载体pSIP-409中,转化至大肠杆菌中,再将其电转化进入乳酸菌,构建重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep.Western blotting检测表达产物的反应原性.最后应用重组乳酸菌pSIP-409-SO7和pSIP-409-SO7-DCpep免疫雏鸡2周,同时设置对照组.实验结果表明SO7和SO7-DCpep基因在植物乳杆菌NC8中成功表达.pS-IP-409-SO7、pSIP-409-SO7-DCpep重组乳酸菌的动物实验表明,与对照组相比,免疫组鸡临床症状不明显,增重效果明显,盲肠病变显著减轻,盲肠病变计分差异显著(P＜0.01),OPG计数显著降低(P＜0.01).各组雏鸡血清中IgG抗体水平表明,SO7-DCpep组与其他各组相比,血清中IgG水平增加,差异显著(P＜0.05),免疫保护率为86％.本研究成功构建了成功构建穿梭表达载体pSIP-409-SO7-DCpep且融合外源基因在乳酸菌中正确表达.动物试验表明本试验构建的重组乳酸菌可有效抵抗球虫卵囊攻击,具有较好的保护效果.本研究为球虫新型疫苗的开发开辟了新思路.

摘要： 目的：探讨流感病毒HA跨膜区对IBV交叉免疫性的影响。方法：采用RT-PCR技术，分别扩增IBV H120毒株的S1基因和猪流感H3N2、禽流感H5NI毒株的HA部分序列。采用重叠PCR获得两个融合基因S1/H3和SI/H5。结果：vSl/HS免疫组对2种异源毒株的相对抗体水平略低于vSl免疫组，而vSl/H3免疫组对2种异源毒株的相对抗体水平高于vSl免疫组。结论：H3N2流感病毒HA跨膜区能增加IBV的交叉免疫性。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明公开了一种藻蓝蛋白/嵌合降钙素融合基因、融合蛋白、重组质粒、转基因酿酒酵母及应用。本发明将构建得到的线性rDNA2‑leu2‑Ppgk‑cpcB/5hsCT‑rDNA1片段以rDNA为同源重组位点介导整合到亮氨酸缺陷型酿酒酵母中获得转基因酵母BY4742‑LPB5，实现了外源基因在酿酒酵母细胞内的高效稳定表达，大大提高了降钙素的表达稳定性，且消除了抗生素等选择标记给后期工业化生产带来的环境污染不良影响或食品安全性问题。酿酒酵母生产周期短，发酵技术成熟，安全性好，且转基因酿酒酵母不需要蛋白提取、切割加工和纯化等繁琐工艺就可以直接口服，极大地降低了工业化生产成本。

摘要： 本发明提出一种BCR‑ABL融合基因检测试剂盒和BCR‑ABL融合基因检测方法。所述BCR‑ABL融合基因检测试剂盒包括多种引物和多种探针；所述BCR‑ABL融合基因检测方法包括：以所得样本的RNA为模板，利用多种所述引物和多种所述探针对所述RNA进行微滴式数字PCR扩增；计算BCR‑ABL融合基因与ABL基因拷贝数比值，得到BCR‑ABL融合基因的突变比例。本发明可有效检测3种类型的BCR‑ABL融合基因0.001％的低频突变，特异性强，灵敏度高，检测周期短，结果严谨可靠，实用性强，为慢粒白血病患者诊断以及临床监测提供科学依据。

摘要： 本发明公开了融合基因检测参考品的制备方法及融合基因检测参考品的应用。该方法采用阴性DNA对融合基因阳性片段库进行稀释，得到包括至少1个稀释梯度的融合基因检测参考品；所述融合基因阳性片段库包括至少11个融合基因阳性片段。本发明采用多个融合基因阳性片段，检测覆盖范围广，为将来克服DNA层面融合检测难、漏检多提供了一个新思路，为融合基因检测产品的性能评价标准提供了一个检测的样板，为融合检测技术的进步提出了一个新指标，具有广泛的应用前景和巨大的产业价值。

摘要： 本发明公开了一种基于基因修饰得到的人重组干扰素融合基因、融合蛋白及其制备方法，属于生物制品技术领域。基于基因修饰得到人重组干扰素IFN‑β的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。由基因编码的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明对人重组干扰素IFN‑β基因序列进行扩增，与质粒pET‑28a(+)相连接得到融合基因，再将融合基因转染至大肠杆菌BL21(DE3)中进行扩增和表达得到了可溶性的融合蛋白，解决了大肠杆菌中无法获得可溶性干扰素的问题。本发明还提供了从稳定细胞系获得高纯度的IFN‑KE50蛋白的纯化方法，由于其具有组氨酸标签，用固定金属镍进行亲和层析可以对目标蛋白进行有效的纯化，纯化后蛋白纯度可达到94.8％。简化了后续的纯化步骤，并可以获得更高的纯度。

摘要： 本发明公开了修饰间充质干细胞的融合基因、具有该融合基因的质粒、慢病毒颗粒、干细胞及应用，该融合基因包含编码分泌信号蛋白的核酸人工序列，编码肺表面活性物质蛋白D的核酸人工序列，编码人源化肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的核酸人工序列，编码自剪切多肽的核酸人工序列，编码Tat蛋白的核酸人工序列，编码单纯疱疹病毒胸苷激酶的核酸人工序列；且以上核酸人工序列顺序依次串联。本发明构建了共同表达TRAIL和HSV‑TK的载体，产生双重的杀伤肿瘤效果。

摘要： 本发明提供了一种Nisin-rbLF-N融合基因、含有该基因序列的表达载体，以及能够高效表达Nisin-rbLF-N融合基因的重组毕赤酵母菌；另外，本发明还提供了所述重组毕赤酵母菌的诱导培养方法。本发明通过PCR方法，将融合基因Nisin-rbLF-N克隆到真核表达载体pPIC9K中，转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达，能够表达出可观的融合蛋白。去糖基化后的融合蛋白经过复合蛋白酶酶解，具有抑干酪乳杆菌(G+菌)和大肠杆菌(G-菌)的作用。

摘要： 本发明的目的在于，提供一种在癌症中鉴定能够成为预测药剂的治疗有效性的指标的基因、以该基因为目标预测药剂的治疗有效性的新型的方法，并进行了肺腺癌的全转录组测序。其结果，鉴定了KIF5B基因和RET基因的框内融合转录产物。另外，该KIF5B-RET基因融合在日本人肺腺癌的6/319（2%）、美国人肺腺癌的1/80（1%）中被检测出。而且发现，该7例均不显示EGFR、KRAS、ALK癌基因这样的公知的活化突变，因此，判明该基因融合为癌化中的责任突变（驱动突变）。该基因融合被认为是导致RET酪氨酸激酶蛋白的稳定活化的因素，因此，对于检测出该基因融合的患者，以RET酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗是有效的。

摘要： 本发明公开了一种基于Ion Torrent测序平台融合基因检测文库的构建方法及融合基因检测的方法。其中，该构建方法包括以下步骤：S1，对样品DNA进行片段化，得到DNA片段；S2，对DNA片段进行末端修复及加碱基A；S3，连接序列已知的接头；S4，进行PCR扩增，得到样本核酸文库；S5，将样本核酸文库基于目标区域捕获平台的探针杂交捕获融合基因及伴侣基因的DNA片段；以及S6，将S5的产物通过PCR引入测序接头序列，得到融合基因检测文库。应用本发明的技术方案，解决了现有技术中Ion Torrent测序平台因RNA样本不合格导致无法检测基因融合及无法检测未知融合断点的融合类型问题。