CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定

摘要

目的:构建小鼠CDC6基因的RNAi真核表达载体PGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi,观察其转染小鼠肝细胞前后CDC6的表达变化.方法:根据GenBank中CDC6的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencer U6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至正常小鼠肝细胞中,用RT-PCR检测CDC6的mRNA的表达及用Western blot方法检测CDC6蛋白水平的表达,并比较转染前后其表达水平的变化.结果:经测序,模板序列与设计序列完全正确.经过RT-PCR及Western blot方法检测,转染干扰质粒后,小鼠肝细胞中CDC6表达在mRNA及蛋白水平都有明显的下降.结论:成功构建了CDC6基因的RNAi真核表达载体并转染至小鼠肝细胞中,为下一步探讨CDC6在肝再生的作用奠定了基础.