一种获取精确胚胎天数鼠脑皮质神经细胞原代培养方法

摘要

目的:探讨获取精确胚胎天数鼠脑皮质神经细胞原代培养方法.方法:首先将性成熟雌雄SD大鼠1∶1合笼于代谢饲养盒内,次日观察有无阴栓(同时做阴道涂片),若有记为E0.取E17孕鼠断颈处死,无菌状态下取出子宫,剥离羊膜与胚外膜,取得胚胎.胚胎断头,在解剖显微镜下用尖镊沿双眼、小脑和脑干腹侧切取大脑皮质,用0.125％胰酶进行温和消化,采用MEM加10％胎牛血清、10％马血清和1％ L-Glutamine混合培养基,用0.73 MPoly-L-Omithine Hydrobromide处理的培养板入37℃,10％CO2孵箱内培养.结果:雌鼠一次可排出阴栓3-5个不等,阴栓为奶黄色、锥体形、质韧.同时做阴道涂片可见活动精子；获取得胚胎脑皮质细胞呈贴壁生长,其胞体饱满,折光性好,突起明显,与周围细胞形成网络连接.结论:用阴栓并精子涂片判断胚胎胎龄简便而准确；E17胚胎适宜体外培养获得脑皮质细胞；组合培养基加处理过的培养板和10％ CO2孵箱浓度的新方法获得了状态良好的脑皮质神经细胞.