人结合珠蛋白cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定

摘要

目的:克隆人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)cDNA,并在大肠杆菌中表达和鉴定.方法:从Hela细胞中分离总RNA,采用RT-PCR方法获得人Hp cDNA,分别克隆至原核表达载体pET-32a和PGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE及Westem blot鉴定.结果:成功构建了高效原核表达质粒PET-32a-Hp和PGEX-4T1-Hp;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约30 kD和37 kD的目的蛋白;表达产物经Ni2+-NTA离子交换树脂纯化,纯度＞90％.结论:在E.coli成功表达和纯化了人Hp融合蛋白,为进一步开发人Hp诊断试剂打下基础.