M1乙酰胆碱受体对AMPA受体GluA1-Ser831位点的调控作用

摘要

目的:从海马神经元谷氨酸离子型受体--AMPA受体亚基GluA1的831位丝氨酸(GluA1 Ser831)磷酸化角度,探讨M1乙酰胆碱受体对AMPA受体GluA1亚基的调控作用及作用机制.方法:本研究以成熟的原代海马神经元为实验对象,用不易被降解的卡巴胆碱(Carbachol,CCh)作为胆碱受体激动剂,以免疫印迹法作为蛋白和磷酸化蛋白的主要检测手段,结合不同蛋白抑制剂研究M1受体调控AMPA受体GluA1亚基的关键信号分子及其机制.结果:①与对照组相比,CCh组Ser831的磷酸化水平显著升高.②CCh促进Ser831磷酸化的现象在M1受体选择性拮抗剂哌仑西平(Pirenzepine)+CCh组消失,CCh升高GluA1-Ser831磷酸化水平的作用由M1受体介导.③蛋白激酶C(Protein kinaseC,PKC)抑制剂白屈菜红碱(Chelerythrine chloride,CHCL)能对抗CCh促进GluA1-Ser831位点磷酸化的作用,而钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Calcium/calmodulin-dependent kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN62不能对抗CCh的作用.④为检测体内GluA1-Ser831的磷酸化情况,用小鼠海马组织定位注射CCh和CHCL,CCh组小鼠海马组织GluA1-Ser831位点的磷酸化水平升高,CHCL能对抗这种作用,PKC介导了M1受体激活所导致的GluA1-Ser831磷酸化水平的升高.结论:M1受体通过激活PKC促进GluA1-Ser831的磷酸化.