大豆下胚轴质膜H+-ATPase质子转运的测定

摘要

以大豆下胚轴为材料,采用改进的匀浆介质,通过两相法制得具有质子转运活力的高纯度质膜微囊.并且发现冻融处理可以促进质膜微囊的翻转而提高荧光猝灭效率.质子载体和质子转运特性分析表明,由Mg2+-ATP引发的荧光猝灭可以被质子载体CCCP恢复,并被质子通道抑制剂DCCD抑制;并且发现质膜H+-ATPase专一抑制剂钒酸钠可以完全抑制荧光猝灭,同时发现荧光猝灭依赖于Mg2+,并受K+刺激,最适pH为6.5.以上证明所测荧光猝灭是由质膜H+-ATPase所进行的质子转运引起的.结果同时表明,维持H+-ATPase合适构象和提高质膜微囊封闭性是制备具有H+转运活力质膜微囊的两个关键因素.