P450cam突变体蛋白表达、纯化与结晶的改进及其四突变体(F87L/Y96F/L244A/V247A)晶体结构

刘斌斌; 孙蕾; 徐峰; 娄智勇; 庞海; L．L．WONG; 刘一苇

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在P450cam突变体蛋白纯化过程中使用280 nm/392 nm双波长比值检测蛋白质纯度,采用β-巯基乙醇对蛋白质进行还原性保护,有效地缩短了纯化进程,纯化效率相应提高.以PEG 8000为沉淀剂经悬滴汽相扩散法筛选得到适合衍射的P450cam四突变体(F87L/Y96F/L244A/V247A)晶体,在Mar-Research面探测器系统上收集了0.22 nm分辨率的X射线衍射数据.采用同晶差值傅立叶法解析结构,最后的晶体学R因子和Rfree分别为0.197和0.247,键长偏差为0.001 77 nm,键角偏差为1.96°.结构测定显示P450cam四突变体(F87L/Y96F/L244A/V247A)和P450cam野生型的整体构象无重大变化,突变后活性口袋变大而疏水性增加,这与突变设计预期目标一致.

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来源
《生物化学与生物物理进展》|2004年第7期|611-615|共5页
作者
刘斌斌; 孙蕾; 徐峰; 娄智勇; 庞海; L．L．WONG; 刘一苇;
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作者单位

清华大学结构生物学实验室,教育部蛋白质科学重点实验室,北京,100084;

清华大学结构生物学实验室,教育部蛋白质科学重点实验室,北京,100084;

清华大学结构生物学实验室,教育部蛋白质科学重点实验室,北京,100084;

清华大学结构生物学实验室,教育部蛋白质科学重点实验室,北京,100084;

清华大学结构生物学实验室,教育部蛋白质科学重点实验室,北京,100084;

Department of Chemistry Inorganic Chemistry Laboratory University of Oxford U.k;

清华大学结构生物学实验室,教育部蛋白质科学重点实验室,北京,100084;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类结构化学;
关键词
P450cam,四突变体,纯化,双波长检测,晶体结构;
入库时间 2023-07-25 16:27:48

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