负载自噬抑制小干扰RNA的聚精氨酸多肽纳米胶束抗肿瘤转移作用的初步研究

摘要

目的 制备一种负载si-Beclin1的阿霉素聚精氨酸多肽纳米胶束，考察其对前列腺癌细胞的体外抗肿瘤转移能力，并探索其可能的作用机制。方法 采用多肽固相合成法合成聚精氨酸组氨酸（HR）,再与阿霉素衍生物（DOX-EMCH）通过缩合反应合成DHR,产物与L-半胱氨酸反应并纯化得到DHRss。DHRss与si-Beclin1共孵育形成聚合物胶束DHRss-B。通过透射电镜观察形态，动态光散射法测定其粒径和电位，同时考察其稳定性；在人前列腺癌细胞株PC-3细胞中，采用流式细胞术考察细胞摄取情况；采用CCK-8法检测DHRss-B抗细胞增殖能力；采用荧光显微镜观察MDC染色自噬小体的生成；采用Western blot法观察Beclin1、LC3及Paxillin蛋白的表达；采用Transwell法观察纳米胶束抗细胞侵袭能力。结果 制备的聚精氨酸多肽胶束（DHRss-B）粒径大小合适，平均粒径为（129.9±2.5）nm,电位为（25.8±1.65）mV,形态分布均匀，2～8℃放置96 h后稳定性良好。流式细胞结果表明，DHRss-B具有较好的细胞摄取能力；CCK-8结果显示，DHRss-B具有较强的细胞毒性。此外，MDC染色法及Western blot结果显示，DHRss-B可显著抑制阿霉素（DOX）引起的细胞自噬。抗细胞侵袭试验表明，DHRss-B具有较强的抗肿瘤转移能力，可能与抑制Paxillin蛋白的表达有关。结论 负载si-Beclinl的阿霉素聚精氨酸多肽纳米胶束具有较强的抗肿瘤转移能力，具有良好的临床应用前景。