高效液相色谱法测定人血浆中的维生素D_3及25-OH-D_3

摘要

采用高效液相色谱法测定血浆中维生素D_3和25-OH-D_3的含量。样品经乙醇-乙腈(60+40)混合溶液提取后,提取液用氮气吹干,残渣用正己烷溶解后,过Waters silica固相萃取柱净化,净化液用氮气吹干后,将残余物溶于pH 6.5的5mmol·L-1磷酸盐溶液-乙腈-甲醇(30+15+55)缓冲溶液中。待测物在Symmetry C18色谱柱上分离,以pH 6.5的乙腈-5mmol·L^(-1)磷酸盐(20+80)混合液为流动相A,以甲醇-乙腈-四氢呋喃(65+20+15)混合液为流动相B,进行梯度洗脱;采用光电二极管阵列检测器,检测波长为265nm。维生素D_3和25-OH-D_3的线性范围均为3.0~72μg·L^(-1),检出限均为2.0μg·L^(-1)。加标回收率在88.5%~94.1%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于4%。