肉桂醛预处理对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤后自噬的影响

摘要

目的:探讨肉桂醛处理能否通过自噬途径减轻缺氧复氧(H/R)导致的H9C2心肌细胞损伤.方法:选取浓度0 μmol/L～100 μmol/L肉桂醛分别对H9C2心肌细胞进行2 h、4 h、6 h预处理,将细胞缺氧2 h/复氧4 h,建立H/R损伤模型.CCK-8法检测细胞活力,确定最佳给药浓度和给药时间;酶标法检测肉桂醛预处理对H/R心肌细胞培氧液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的影响;以3-甲基腺嘌吟(3-MA)为自噬抑制剂和雷帕霉素(Rapa)为自噬增强剂,试验随机分为:正常对照组、模型对照组、肉桂醛60 μmol/L组、3-甲基腺嘌呤5 mmol/L组、雷帕霉素100 nmol/L组,以单丹磺酰戊二胺(MDC)自噬荧光染色检测细胞自噬体的聚集,Westernblot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62的表达.结果:与正常对照组相比0 μmol/L～100 μmol/L肉桂醛处理2 h、4 h、6 h后,细胞活力均有不同程度提高,且在60 μmol/L、6 h达到峰值;与正常对照组相比,模型对照组LDH水平显著升高(P＜0.01),自噬荧光强度显著增加,P62蛋白表达显著下调,Beclin蛋白表达显著上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著增加(P＜0.01).与模型对照组比较,肉桂醛60μmol/L组、3-甲基腺嘌吟5 mmol/L组自噬荧光强度明显降低(P＜0.05或P＜0.01),Beclin-1蛋白明显下调、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低,P62蛋白表达显著上调(P＜0.01),而雷帕霉素作用相反(P＜0.05或P＜0.01).肉桂醛60 μmol/L组LDH释放显著降低(P＜0.01).结论:肉桂醛可通过抑制缺氧复氧后的自噬水平,增加细胞活力,减轻心肌细胞损伤.