超氧化物歧化酶固相修饰的研究

摘要

对超氧化物歧化酶固相修饰进行初步研究。选择Q-Sepharose FF作为固相吸附介质,考察了吸附的影响因素。采用三聚氯氰活化好的单甲氧基聚乙二醇5 000分别对游离SOD和吸附在Q-Sepharose FF上的固相SOD进行化学修饰,考察了修饰的影响因素,并对两者进行了比较。Q-Sepharose FF吸附SOD的最佳条件:时间30 min,pH值9.0,SOD浓度3.0 mg/mL,最佳吸附条件下吸附量约为22.5 mg/mL;最佳固相修饰条件:时间270 min,修饰缓冲液浓度40 mmol/L,mPEG-5 000与SOD的摩尔比为50∶1,最佳固相修饰条件下固相SOD修饰率为38.3%,修饰后酶活为5 555 U/mg,酶活回收率为72.3%;经SDS-PAGE分析表明固相修饰可以减少修饰的随机性。