胰核糖核酸酶A的原核表达及纯化复性研究

摘要

生化提取牛胰核糖核酸酶A工艺复杂、得率较低,而且动物源产品不能用于基因免疫质粒的生产。该工作采用原核表达路线解决上述问题。提取牛胰腺总RNA,利用RT-PCR扩增获得牛核糖核酸酶A基因,连入pGEM-T中测序验证。目的基因克隆到表达载体pET32a中,摇瓶培养得到带有Trx标签的融合蛋白表达产物,为包涵体表达形式。裂解上清经8mol/L尿素变性后采用镍柱纯化,在柱上用肠激酶切掉标签得到纯化的目的蛋白。目的蛋白经稀释复性后检测酶活。SDS-PAGE检测得到目的蛋白为Mr16k。经检测,复性纯化的核糖核酸酶A具有良好的RNA降解活性。