改造的sTRAIL基因在重组毕赤氏酵母菌中的表达及活性分析

摘要

利用甲醇毕赤氏酵母系统对改造的TRAIL基因进行优化表达研究及产物活性分析，确定改造后的基因表达量是否提高。应用电转化技术将4种重组表达载体转化毕赤氏酵母菌GS115，经Zeocin抗生素筛选、PCR检测获得阳性酵母工程菌，采用摇瓶发酵及SDS-PAGE进行高效表达菌株的筛选，经CM-柱层析、Western blot及MTT法对重组蛋白进行初步纯化、抗原活性检测和生物学活性分析，确定了最佳摇瓶发酵条件：培养基最适pH值5．5～6．5，最佳甲醇诱导浓度为1％，最适甲醇诱导周期为96h。筛选到高效表达菌株pPICZα-A—sTRAIL／GS115、pPICZα-A—sTRAILK／GS115、pPICZα-A—sTRAILA／GS115、pPICZα-A—sTRAILAK／GS115，其表达量分别达到67，113．4，98，145mg／L，改造后的TRAIL具有抗原活性和生物学活性。对TRAIL基因的改造可以提高其在甲醇毕赤氏酵母系统中的表达。