苦瓜MAP30蛋白功能区段缺失体构建及其生物活性研究

摘要

通过PCR技术从质粒pET30a-MAP30中分别得到编码M1(D1-K195)、M2(D1-E187)、M3(A11-K195)、M4(A11-E187)4个功能区段缺失体蛋白的序列,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET22b中,表达载体用CaCl2介导的化学转化法转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,然后利用菌落PCR筛选阳性克隆。工程菌在28℃时经1mmol/LIPTG诱导5h时实现高效表达,4种重组蛋白在大肠杆菌中都以包涵体形式存在。利用MTT法分析4个重组蛋白复性液的抗肿瘤活性,结果表明4个功能区段缺失体重组蛋白均对人羊膜细胞系wish、鼠髓白血病细胞系NFS-60、小鼠腹水瘤细胞S-180有杀伤作用,其中对鼠髓白血病细胞系NFS-60抑制作用最明显。M1、M2、M3和M44个缺失体重组蛋白对NFS-60作用的IC50分别为2.51、2.42、1.89μg/ml和1.90μg/ml。细胞毒性分析表明,4个重组蛋白对人正常肝细胞系HL-70的细胞毒性极小,且都低于重组MAP30蛋白的细胞毒性。