苦瓜蛋白MAP30的抗菌作用及PTD-MAP30跨克氏原螯虾肠膜功能的研究

摘要

根据GenBank上MAP30基因的全序列,设计引物PCR扩增得到MAP30基因,并通过重叠PCR方法扩增得到PTD-MAP30基因,构建重组表达载体MAP30-pET28a(+)和PTD-MAP30-pET28a(+),转化大肠杆菌BL21 (DE3).基因工程菌株在18℃IPTG条件下诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示有与预期大小相符合的蛋白,并用Ni2+-柱纯化目的蛋白.抑菌圈实验发现MAP30蛋白对弧菌敏感性较高,MTT法测得最小抑制浓度MIC为300 μg/mL,生长抑制曲线显示蛋白对弧菌的抑制作用具有浓度依赖性.ELISA实验说明TAT-MAP30蛋白可以快速穿过克氏原螯虾的肠上皮细胞并进入到血淋巴中,在1h左右检测到的蛋白量最多,而且维持时间可以达到6h.