诱生型一氧化氮合酶FAD结合区的克隆、表达和活性鉴定

摘要

诱生型的一氧化氮合酶 (iNOS)的表达可以被多种细胞因子、IPS、多种试剂及创伤等诱导 ,很多疾病的产生发展都与iNOS的过度表达有关。为进一步研究iNOSFAD结合区的功能和特异性抑制肽的筛选 ,用PCR方法克隆出iNOSFAD结合区编码基因片段 (iNOS2 0 31 2 6 6 0bp) ,并在大肠杆菌中得到高效表达 ,得到表达率 >30 %的包涵体 ;经过Ni金属螯合亲和柱层析和电泳纯化 ,得到纯度 >95 %的重组蛋白 ,相对分子质量为2 3 0 0 0。运用波长扫描 ,证实纯化蛋白具有与FAD的结合活性 。