纳豆激酶分离纯化与鉴定

摘要

为了提高纳豆激酶的溶栓活性 ,从纳豆粗提物中分离纯化了纳豆激酶。采用Butyl Toyopearl柱层析对纳豆粗提物进行了分离纯化 ,以试管法确定和收集了活性部位 ,用纤维蛋白平板法测定了活力 ,并用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS PAGE)对分离纯化的效果进行了检验。考察了纳豆激酶粗提物在不同温度和湿度条件下的稳定性。结果表明在SDS PAGE中观察到三条明显的蛋白谱带 ,其中相对分子质量为 192 75和 2 710 1的区带具有与文献报道类似的纳豆激酶的相对分子质量和纤溶活性 ,而相对分子质量为 14 4 0 0的蛋白区带与文献报道的纳豆激酶的相对分子质量大有差异。纯化倍数为 5 0倍 ,活性回收率为 75 .5 7%。初步稳定性实验结果表明 :其外观在 4 0℃和 6 0℃保存条件下发生变化 ,纤溶活力在 6 0℃保存条件下发生显著变化。而 4℃条件下活力和外观却很少有变化 ;纳豆粗提物在不同湿度条件下均具有较强吸湿性。纳豆粗提物对高温和高湿稳定性较差。