骨髓间质干细胞培养上清液调控肝细胞的体外研究

摘要

目的 探讨骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)培养上清液对肝细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨BMSC治疗肝纤维化的旁分泌机制.方法 采用密度梯度离心及贴壁细胞分离相结合提取BMSC.培养48 h的BMSC细胞培养上清液按BMSC不同处理(培养)时间和含量两种方法 建组.不同处理时间建组:取培养48 h BMSC上清液处理肝细胞(完全培养),分为处理24 h、48 h、72 h组,对照组为1640培养基处理24 h的肝细胞.不同含量BMSC建组:实验1组为完全BMSC培养上清液(含肝细胞的6孔板中每孔加入BMSC上清液2 ml)处理肝细胞;实验2组为部分BMSC培养上清液(每孔加BMSC上清液1 ml + 1640培养基1 ml)处理肝细胞;对照组为完全细胞培养基(每孔加1640培养基2 ml)处理肝细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测BMSC旁分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)情况及培养时间对其的影响;用流式细胞仪观察肝细胞细胞分期和检测凋亡细胞数;用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测样本上清液中白蛋白的表达.结果 BMSC分泌HGF,其含量变化具有时间依赖性.加入BMSC培养上清液后,与对照组相比,实验1组中的培养上清液可以明显促进肝细胞增殖、抑制其凋亡,并随着处理时间的延长而增加(处理72 h＞处理48 h＞处理24 h,均为P ＜ 0.05);实验组(1组、2组)的白蛋白分泌较对照组上调,且随着处理时间的延长白蛋白含量增加.结论 BMSC有可能通过分泌HGF促进肝细胞增殖、抑制凋亡,促进白蛋白分泌,从而抑制肝脏纤维化.