采用酵母表达载体pWX530构建表达人重组牙骨质蛋白1

摘要

目的:构建含人重组牙骨质蛋白1(recombination human cementum protein 1,rhCEMP1)基因的真核表达载体,观察其在酿酒酵母细胞中的表达.方法:采用PCR方法扩增rhCEMP1基因,利用定向克隆技术将rhCEMP1基因插入到中间载体pTeasy中,再进一步转插入载体pWX530.重组的pWX530-rhCEMP1在大肠杆菌DH5α中扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定所构建的质粒.经鉴定正确的表达载体pWX530-rhCEMP1转入酵母感受态细胞中,酵母经氨基酸营养缺陷型筛选后培养表达.利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和酶联免疫吸附测定(ELISA)分析蛋白表达情况,离子交换层析提纯蛋白.结果:构建的重组质粒成功转入酵母细胞,通过SDS-PAGE和ELISA检测rhCEMP1表达成功.结论:成功构建的含rhCEMP1基因的真核表达载体pWX530-rhCEMP1,并能转入酵母细胞中成功表达.