宽体沙鳅(Botia reevesae)热休克蛋白70基因的克隆及表达分析

摘要

为深入分析热休克蛋白响应胁迫的分子机制,实验以宽体沙鳅(Botia reevesae)为研究对象,利用同源克隆和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆得到宽体沙鳅热休克蛋白70(heat shock protein,BR-HSP70)的cDNA全长.结果发现,BR-HSP70 cDNA全长为2371bp,包含1947bp的开放阅读框(opening reading frame,ORF),102bp 5'-非编码区(untranslated region,UTR)和322bp 3'-UTR等.通过序列同源性比对发现,BR-HSP70 cDNA与团头鲂(Megalobrama amblycephala)和猪(Sus scrofa)的同源性分别为98％及83％,且ORF编码的649个氨基酸中含有HSP70家族的家族信号标签、N-糖基化位点及EEVD等保守区域.结果表明,克隆的cDNA为宽体沙鳅HSP70基因.实时荧光定量PCR分析发现,氨氮胁迫和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)侵染均会显著上调宽体沙鳅鳃、肝脏及肾脏HSP70 mRNA的表达(P＜0.05),表明HSP70基因在宽体沙鳅应对环境胁迫中发挥了重要的抗应激作用.