杜鹃花ISSR-PCR反应体系的建立和优化

摘要

以杜鹃花为试验材料,采用正交实验方法,研究模板DNA浓度、ISSR引物浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度等5个因素对ISSR-PCR反应体系的影响,以建立适合杜鹃花的ISSR-PCR最佳扩增体系.结果表明:杜鹃花ISSR反应体系的最佳条件为模板DNA用量为60 ng/20μL,ISSR引物浓度0.60 μmol/L,dNTPs浓度0.50 μmol/L,Taq DNA聚合酶浓度30 U/mL,Mg2+浓度为0.6 mmol/L.采用该反应体系可以从10份杜鹃花(R.simsii)基因组内扩增出稳定性高、重复性好ISSR-PCR产物.该研究为杜鹃花的遗传多样性分析、ISSR指纹图谱构建、亲缘关系鉴定等研究奠定了基础.