温郁金SCoT-PCR反应体系的正交优化

摘要

以温郁金为试材,运用L25 (56)正交设计在5个水平上对影响温郁金SCoT-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶和引物5个因素进行优化试验,对PCR结果进行极差分析.建立并优化温郁金的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)体系,以期为温郁金的遗传多样性分析及分子鉴定等研究提供技术支持.结果表明:建立了温郁金SCoT-PCR的最佳反应体系(20 μL):引物0.8μmol/L,dNTPs 0.4 mmol/L,Mg+1.5 mmol/L,Taq酶0.5U,模板DNA 40 ng,且确定各因素对温郁金SCoT-PCR反应效果的影响大小依次为:dNTPs＞ Taq酶＞引物＞Mg2+＞模板DNA,其中dNTPs对体系影响最大.优化的温郁金SCoT-PCR反应体系在多个温郁金品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,可用于今后温郁金品种遗传多样性分析、系统发育分析、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究.