肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能中的作用

摘要

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白（Arp）2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）小鼠肺泡巨噬细胞（AM）吞噬功能中的作用。方法 40只小鼠按随机数字表法分为健康对照组、健康Arp2/3复合体抑制剂（CK666）组、慢阻肺组及慢阻肺CK666组各10只,慢阻肺组和慢阻肺CK666组采用香烟烟雾暴露法建立慢阻肺模型,其对照组无烟雾暴露。造模90 d后,取各组小鼠肺组织分离AM。流式细胞术测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌（FITC-E.coli）的能力,以平均荧光强度（MFI）和吞噬FITC-E.coli阳性细胞百分比（吞噬%）表示；蛋白印迹法测AM的Arp2和F-肌动蛋白表达；激光共聚焦显微镜测AM的Arp2、F-肌动蛋白、吞噬的FITC-E.coli平均吸光度及Arp2和F-肌动蛋白的共定位；扫描电镜观察AM吞噬时的形态。结果 慢阻肺组AM的MFI和吞噬%均显著低于健康对照组[（4 702±243）比（8 684±234）和（32.21±1.66）%比（65.88±1.77）%,均P＆0.01]；慢阻肺CK666组[（3 597±307）、（22.09±1.89）%]、健康CK666组[（7 446±236）、（50.09±1.64）%]均显著低于各自的对照组（均P＆0.01）。慢阻肺组AM的Arp2和F-肌动蛋白相对表达量均显著低于健康对照组（0.508±0.025比0.813±0.040和0.462±0.029比0.720±0.039,均P＆0.01）；慢阻肺CK666组（0.265±0.014）、健康CK666组（0.637±0.032）F-肌动蛋白均显著低于各自对照组（均P＆0.01）。慢阻肺组AM的Arp2蛋白、F-肌动蛋白、FITC-E.coli平均吸光度均显著低于健康对照组（34.43±0.56比142.83±1.90、61.59±0.70比145.93±3.05、41.49±0.33比189.17±2.60,均P＆0.01）；慢阻肺CK666组（37.73±1.04、28.84±2.95）和健康CK666组（137.07±1.35、157.46±1.00）F-肌动蛋白、FITC-E.coli平均吸光度均显著低于各自对照组（均P＆0.01）。慢阻肺组孟德斯共定位系数（MOC）显著低于健康对照组（0.395±0.014比0.880±0.002,P＆0.01）,慢阻肺CK666组（0.297±0.006）、健康CK666组（0.737±0.031）均显著低于各自对照组（均P＆0.01）。健康对照组AM伸出密集且长的丝状伪足,细胞表面突起、皱褶多；健康CK666组AM丝状伪足伸出减少且较短,表面突起、皱褶减少；慢阻肺组和慢阻CK666组AM丝状伪足伸出短小或缺失,表面突起、皱褶明显减少。基础状态和CK666干预后,AM的Arp2、F-肌动蛋白相对表达量及其MOC与MFI之间呈正相关。结论 Arp2/3复合体活性下降致慢阻肺小鼠AM吞噬功能低下,且慢阻肺小鼠AM对Arp2/3复合体抑制剂更敏感。