含Shp-2的酪氨酸蛋白磷酸酶在神经肌肉接头形成中的作用

摘要

目的研究酪氨酸蛋白磷酸酶及含SH2结构域的酪氨酸蛋白磷酸酶（Shp-2）在神经肌肉接头形成过程中的信号调控作用。方法培养小鼠C2C12成肌细胞并使之分化为成熟的肌管细胞,应用免疫沉淀、免疫印记、RNA阻断（RNAi）以及显微荧光等技术检测酪氨酸磷酸酶、Shp-2在肌特异性受体酪氨酸激酶（MuSK）活化、乙酰胆碱受体（AChR）成簇过程中的作用。结果应用酪氨酸蛋白磷酸酶的抑制剂过钒酸盐（pervanadate）使MuSK活性增加,同时增加了非聚集蛋白（agrin）依赖的AChR聚集,与对照组（0·96簇/细胞）比较增加了6·7倍（6·43簇/细胞）（P＜0·01）;同时过钒酸盐也增加agrin依赖的AChR聚集;通过免疫印记筛选显示Shp-2是小鼠肌肉细胞的主要酪氨酸蛋白磷酸酶;阻断Shp-2蛋白表达后,MuSK活性以及AChR聚集增加。结论包括Shp-2在内的酪氨酸蛋白磷酸酶信号被抑制时,MuSK活性以及AChR聚集增加;被激活时则MuSK活性以及AChR聚集降低。