HEK293细胞上表达的人类超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型2和亚型4的电生理

摘要

目的将人类超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型2（hHCN2）和亚型4（hHCN4）的基因表达于 HEK293细胞系上,观察其表达的通道的电生理特点。方法包含目的基因 hHCN2或hHCN4的 cNDA 亚克隆到腺病毒穿梭载体 pAdTrack-CMV,穿梭载体和病毒骨架载体 pAdEasy-1在大肠杆菌重组,病毒经过包装和扩增后分别转染 HEK293细胞。利用全细胞膜片钳技术,记录分别转染了 hHCN2和 hHCN4的 HEK293细胞上的超极化激活钾电流（If）。结果转染 hHCN2和 hHCN4的HEK293细胞上产生超极化激活的内向电流。两种通道的半数最大激活电压分别为-114.8 mV±3.3 mV 和-125.9 mV±2.9 mV,反向曲线斜率分别为11.1 mV±1.2 mV 和13.7 mV±1.3 mV。两者的激活动力学明显不同,刺激电压为-110 mV 时,通道的激活时间常数分别为0.99 s±0.21 s 和8.47 s±2.85 s。两种通道对钠离子和钾离子的相对通透性分别为0.40和0.34。两种电流均可被2mmol/L 的氯化铯（CsCl）阻断。结论目的基因 hHCN2和 hHCN4在 HEK293细胞上成功表达,形成的两种通道具有明显不同的激活动力学。