孕酮对脂肪细胞促酰化蛋白受体和下游信号蛋白表达的作用

摘要

目的观察孕酮对3T3-L1（前）脂肪细胞促酰化蛋白（ASP）受体C512 mRNA 和细胞表面 C5L2蛋白表达的影响,以及孕酮对 ASP 下游信号蛋白的作用。方法体外培养3T3-L1细胞,诱导细胞分化,不同浓度孕酮作用于3T3-L1（前）脂肪细胞,孵育过夜后收获细胞,分别采用 RT-PCR和流式细胞仪检测 ASP 受体 mRNA 和蛋白表达情况;采用 Western 印迹法检测基础状态和 ASP 激发后 Gαq/11,Gβ,p-PKCα和 p-PKCξ蛋白表达。结果孕酮最大抑制成熟脂肪细胞14%C5L2 mRNA（P＞0.05）和蛋白表达22%（36%±15%vs 46%±12%,P＜0.01）,高浓度孕酮(1×10-6mol/L)能显著性抑制前脂肪细胞66%C5L2 mRNA（0.17±0.11 vs 0.50±0.18,P＜0.01）和29%C5L2蛋白表达（36%±16%vs 51%±20%,P＜0.05）。高浓度孕酮在一定程度上抑制 ASP 激发后成熟脂肪绌胞 Gαq/11,GB,p-PKCα和 p-PKCζ的表达,各蛋白表达分别减少了41%（0.71±0.21 vs 1.20±0.24,P＜0.05）,63%（0.55±0.32 vs 1.48±0.40,P＜0.05）,49%（0.53±0.20 vs 1.04±0.19,P＞0.01）和32%（0.36±0.10 vs 0.53±0.20,P＞0.05）。在前脂肪细胞,高浓度孕酮显著性抑制ASP 刺激的59%Gαq/11（0.42±0.18 vs 1.04±0.28,P＜0.01）,43%Gβ（0.77±0.09 vs 1.35±0.27,P＜0.05）,51%p-PKCα（0.44±0.15 vs 0.90±0.25,P＜0.05）和30%p-PKCζ（0.27±0.08vs 0.39±0.12,P＜0.05）蛋白表达。结论孕酮诱导 ASP 抵抗的发生,ASP 抵抗参与了高浓度孕酮引起的脂肪细胞胰岛素抵抗状态的病理生理过程。