PI3K和Notch信号通路对哮喘小鼠CD4+T淋巴细胞活化及增殖的协同调控作用

摘要

目的探讨磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）和Notch信号通路对哮喘小鼠CD4+T淋巴细胞活化及增殖的协同调控作用。方法以卵清白蛋白（OVA）致敏激发法制备16只小鼠哮喘模型,按随机数字表法分为对照组和哮喘组各8只,免疫磁珠法分离哮喘小鼠脾脏原代CD4+T淋巴细胞。在细胞水平分组:未干预组（A组）,PI3K抑制剂组（LY294002）（B组）,Notch抑制剂组（γ-分泌酶抑制剂,DAPT）（C组）,PI3K抑制剂+Notch抑制剂组（D组）,均以10μg/ml的植物血凝素和1000 U/ml的白细胞介素（IL）-2刺激增殖6 h后进行干预;用流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞内的细胞周期蛋白（Cyclin）A、Cyclin D1和P27kip1的蛋白表达,反转录-PCR测定各指标的mRNA表达。结果分选后CD4+T淋巴细胞纯度达90.0%±5.2%,CD4+T淋巴细胞的存活率为94.8%±3.2%。哮喘组小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞Cyclin A、Cyclin D1蛋白（28.0%±3.5%、14.9%±3.4%）和mRNA（0.55±0.16、1.38±0.42）表达水平均显著高于对照组（13.4%±3.5%、7.7%±1.8%和0.32±0.10、0.92±0.37）（P=0.002、0.036和P=0.007、0.042）,而哮喘组P27kip1蛋白和mRNA表达水平（23.3%±3.9%和0.16±0.03）均显著低于对照组（37.5%±5.8%和0.32±0.03,P=0.006和P=0.000）。A、B、C、D各干预组哮喘CD4+T淋巴细胞Cyclin D1蛋白和mRNA表达水平分别为12.2%±3.7%、7.3%±3.0%、8.1%±2.3%、4.2%±1.7%和1.71±0.44、1.07±0.31、1.21±0.32、0.62±0.20,B、C、D组均显著低于A组（均P＜0.01）,D组均较B、C组下降更为显著（均P＜0.05）。A、B、C、D各组P27kip1蛋白表达水平分别为22.9%±3.0%、31.6%±5.3%、28.4%±5.6%、44.6%±2.8%,B组显著高于A组（P=0.016）,D组均显著高于A、B、C组（P=0.003、0.004、0.000）;mRNA表达水平分别为0.16±0.07、0.36±0.09、0.63±0.08、0.99±0.21,B、C、D组均显著高于A组（P=0.016、0.000、0.000）,D组均显著高于B、C组（P=0.000、0.023）。A、B、C、D各组CD4+T淋巴细胞Cyclin A蛋白和mRNA表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 PI3K信号通路与Notch信号通路通过共同促进CD4+T淋巴细胞内的正性调控因子Cyclin D1表达的上调和负性调控因子P27kip1表达的下调,而起到协同调控哮喘CD4T淋巴细胞的活化及增殖的作用。