NRF2基因启动子-617C/A基因多态性对内毒素介导巨噬细胞炎症反应的影响

摘要

目的探讨人核因子E2相关因子（NRF2）基因启动子-617C/A多态性的功能,并观察其对内毒素诱导的巨噬细胞炎症反应的影响。方法构建分别携带NRF2基因启动子-617C、-617A诱导调控系统的质粒及腺病毒载体。应用构建好的质粒转染HEK293细胞后,以双荧光素酶分别验证NRF2基因启动子-617C/A多态的调控效率;应用构建好的腺病毒载体转染RAW264.7细胞,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹检测NRF2 mRNA和蛋白表达水平;内毒素刺激巨噬细胞后,应用Western印迹检测NRF2蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-10的水平。结果 NRF2基因启动子617C组的调控效率显著高于-617A组（0.584±0.016与0.258±0.018,P＜0.05）。内毒素刺激RAW264.7细胞后,-617C组NRF2蛋白和基因水平表达均明显高于-617A组（1.123±0.080与0.951±0.057,1.889±0.031与1.647±0.323,均P＜0.05）。-617 C组上清IL-6、IL-10、TNF-α水平均低于-617A组,其中IL-6、IL-10的表达差异均有统计学意义（均P＜0.05）。-617C组IL-6/IL-10也显著低于-617A组（P＜0.05）。结论 NRF2基因启动子-617C/A多态性对NRF2的表达具有显著影响,并对内毒素刺激后巨噬细胞炎症反应的平衡有着重要调控作用。