香草醛交联重组人骨形态形成蛋白–2/壳聚糖微球对间充质干细胞的影响

摘要

目的观察重组人骨形态形成蛋白–2（rhBMP–2）/壳聚糖微球对间充质干细胞的影响和rhBMP–2的体外释放特征。方法利用乳化交联法来制备包载rhBMP–2的壳聚糖微球, 用电镜观察微球的形态。以微球浸提液为实验组, 以空白培养基为对照组来培养人间充质干细胞, 以检测微球的细胞毒性和对细胞增殖的影响。用动态浸泡的方法来检测rhBMP–2的体外释放特征。通过比较缓释3、7 d获取的微球缓释液与空白培养基对细胞血清碱性磷酸酶（ALP）表达的影响, 来反应缓释的rhBMP–2是否具有生物活性。结果所制备的壳聚糖微球呈球状。将微球浸提液与人间充质干细胞培养24、48 h, 两个时间点实验组与对照组A值差异无统计学意义[24 h:（0.72±0.07）比（0.73±0.05）, P＆0.05;48 h:（1.19±0.11）比（1.27±0.06）, P＆0.05]。将浸提液与细胞培养1、3、7 d, 实验组和对照组细胞数量均逐渐增多, 且每个时间点实验组与对照组A值差异无统计学意义。5 mg微球在体外释放19 d, rhBMP–2逐渐释放, 第19天检测浓度仍达到（216.1±20.0） ng/ml。缓释3 d与7 d组间充质干细胞ALP活性分别为:（0.50±0.07）、（0.68±0.06） μmol pNPP·min–1·mg–1蛋白, 均显著高于空白培养基组（0.14±0.01,P＆0.05）。结论用香草醛为交联剂制备的rhBMP–2微球具有良好的生物相容性, 能够缓释rhBMP–2, 且在制备过程中仍能保持rhBMP–2的生物活性。