人工合成小分子双链RNA通过激活P21蛋白对膀胱癌细胞生长的影响

摘要

目的通过转染人工合成的小分子双链RNA（dsRNA）dsP21-555至膀胱癌细胞系T24和EJ, 观察其对膀胱癌细胞生长的作用。方法根据对膀胱癌细胞的不同处理分为3组:阴性对照组[转染随机序列（dsControl）], 阳性对照组（转染相应的微小RNA即miR-370）和实验组（转染dsP21-555）。实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测3组细胞p21 mRNA及细胞周期依赖性激酶（CDK）4、CDK-6 mRNA的表达;Western印迹法检测P21蛋白和CDK4、CDK6蛋白的表达;流式细胞术测定转染后细胞周期分布;细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力。结果 qPCR结果显示, 与转染dsControl相比, 转染dsP21-555分别上调T24和EJ细胞中p21 mRNA表达至2.46倍（P＆0.01）和2.60倍（P＆0.01）;转染dsP21-555与转染miR-370相比, p21 mRNA表达差异无统计学意义（均P＆0.05）。与转染dsControl相比, 转染dsP21-555分别使T24和EJ细胞中CDK4 mRNA的表达下调43%（P＆0.01）和54%（均P＆0.01）, CDK6 mRNA的表达下调39%（P＆0.01）和36%（P＆0.01）;转染dsP21-555与转染miR-370相比, CDK4、CDK6 mRNA的表达差异无统计学意义（P＆0.05）。Western蛋白印迹检测结果验证了组间p21和CDK4、6基因表达的差异。流式细胞术检测显示, 与转染dsControl相比, 转染miR-370或dsP21-555后, G0/G1期细胞比例明显升高, 而S期和G2/M期细胞比例减少, 细胞周期被阻滞在G0/G1期。细胞增殖实验结果显示, 与转染dsControl相比, 转染miR-370或dsP21-555后细胞增殖能力明显下降（均P＆0.05）, 且转染miR-370与转染dsP21-555间细胞增殖能力差异无统计学意义（P＆0.05）。细胞集落形成实验显示, 转染miR-370和dsP21-555形成的集落数量均较转染dsControl少。结论 dsP21-555能通过RNA激活作用激活P21蛋白的表达并显著抑制膀胱癌细胞的生长。