基于病证结合探讨糖尿病肾病阴虚证大鼠肾损害与自噬的关系

摘要

目的 观察阴虚证对糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾损害以及自噬变化的影响,探讨DKD阴虚证大鼠肾脏病理损害与自噬之间的关系.方法 通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,随机分为正常组、糖尿病组.12周后将糖尿病组中尿蛋白阳性的大鼠随机均分为DKD组、阴虚组,阴虚组大鼠通过左甲状腺素钠片灌胃法制备DKD阴虚证模型.每日观察大鼠一般情况.第16周处死取材,观察大鼠血肌酐(Serum creatinine,Scr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白定量(24-hour urinary protein,24 h Pro)、肾脏病理改变;ELISA法检测阴虚证指标-血清环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(Cyclic guanosinc monophosphate,cGMP)及血清游离甲状腺素(Free Thyroxine 4,fT4)、血清皮质醇(Cortisol,Cort)、雌二醇(Estradiol,E2);透射电镜观察大鼠肾脏超微结构及自噬变化;免疫组化、Western Blot、RT-PCR法检测肾组织纤维化指标纤连蛋白(Fibronectin,FN)、平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)、自噬相关Beclin-1、LC3-II、P62的蛋白及其mRNA表达.结果 与正常组比较,DKD组出现精神萎靡、多饮多食多尿、毛发粗糙等症状,阴虚客观指标血清fT4、Cort、E2、cAMP、cAMP/cGMP比值升高、cGMP下降(P<0.01或P<0.05),24 h Pro、Scr、BUN升高(P<0.01),光镜及电镜下肾脏病理损伤加重,肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达均增高(P<0.05或P<0.01),LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达均下降(P<0.05或P<0.01);与DKD组相比,阴虚组大鼠死亡率增加,出现急躁易怒、饮食饮水量增加、毛发粗糙无光泽、体质量下降等现象,血清fT4、Cort、E2、cAMP、cAMP/cGMP比值(P<0.05或P<0.01),24 h Pro、Scr、BUN进一步升高(P<0.01或P<0.05),cGMP则下降(P<0.01),同时肾脏病理损伤加重,肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达进一步增高(P<0.01或P<0.05),LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达则下降(P<0.01或P<0.05).结论 在病证结合模型下,阴虚证能够加重糖尿病肾病大鼠肾脏病理损伤,可能与抑制肾脏组织的自噬功能有关.