基于Akt/ERK探讨丹蒌片对主动脉平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

摘要

目的 观察丹蒌片对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的兔主动脉血管平滑肌细胞(rabbit aortic smooth muscle cell,RASMC)增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其与Akt及ERK信号通路的关系.方法 培养RASMC,建立Hcy诱导RASMC增殖模型,实验分为空白组、Hcy组、丹蒌片组、瑞舒伐他汀组(即可定组)、丹蒌片联合瑞舒伐他汀组(即混合组),后三组分别给予丹蒌片、瑞舒伐他汀及丹蒌片联合瑞舒伐他汀含药血清.作用24 h后,Cell Titer-Glo法测细胞增殖,Transwell法测细胞迁移,流式细胞仪Annexin V/PI双染法测细胞凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)测信号通路相关蛋白Akt和ERK总蛋白及磷酸化蛋白表达量.结果 ①与空白组相比,Hcy组细胞增殖和迁移显著增加(P＜0.01),凋亡率显著降低(P＜0.01);与Hcy组相比,三种含药血清组细胞增殖和迁移明显减少(P＜0.01),凋亡率明显增加(P＜0.01);其中混合组增殖和迁移较丹蒌片组和可定组明显降低(P＜0.01),凋亡率更高(P＜0.01);与可定组比,丹蒌片组增殖略高,但差异均无统计学意义(P＞0.05),丹蒌片组细胞迁移数明显多于可定组(P＜0.05),凋亡率明显低于可定组(P＜0.05).②各组Akt及ERK总蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05);与空白组比较,Hcy组p-Akt及p-ERK蛋白表达量均显著上调(P＜0.01);与Hcy组相比,三种含药血清组p-Akt及p-ERK蛋白表达量明显下调(P＜0.01);其中混合组的p-Akt及p-ERK蛋白表达较丹蒌片组和可定组进一步下降(P＜0.01);与可定组比,丹蒌片组p-Akt及p-ERK蛋白表达量增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 丹蒌片可拮抗Hcy诱导的兔动脉血管平滑肌细胞增殖和迁移,促进其凋亡,其作用可能与上调p-Akt及p-ERK信号通路蛋白有关.