无POU域八聚体结合蛋白基因的克隆及其在Hepa 1-6细胞内的表达

摘要

目的 构建小鼠无POU域八聚体结合蛋白(non-POU-domain-containing,octamer binding protein,NonO)真核表达载体并在小鼠Hepa 1-6肝癌细胞内表达,观察NonO胞内表达、定位及脂多糖(LPS)对其定位的影响.方法 提取小鼠肝组织总RNA,RT-PCR扩增小鼠NonO基因的蛋白编码序列.采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA真核表达载体中,将该载体瞬时转染Hepa 1-6细胞,通过细胞免疫荧光方法观察NonO的胞内表达及LPS对其定位的影响.结果 酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;细胞免疫荧光可见NonO在Hepa 1-6细胞内表达、分布于细胞核,LPS刺激后NonO分布无明显变化.结论 成功构建NonO真核表达载体,为研究NonO在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体.进一步证实NonO为定位于细胞核的核蛋白.