布鲁氏菌可视化环介导等温扩增方法的建立及应用

摘要

布鲁氏菌病(简称布病)是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患疾病,影响了畜牧业的健康发展,甚至威胁到了人类的健康安全,造成了较严重的经济社会损失.因此,对布鲁氏菌病的防控十分必要.本研究主要基于布鲁氏菌保守基因Omp2a,利用在线网站设计3对引物,并优化其反应条件与反应体系,建立了一种检测布鲁氏菌的可视化LAMP方法.同时,将建立好的LAMP方法与聚合酶链式反应(PCR)检测方法相比较,并交由陕西省疾病预防控制中心进行实际样本检测.结果表明,基于羟基萘酚蓝(HNB)指示剂,LAMP扩增的结果可凭肉眼观察.建立的LAMP检测方法能准确区分布鲁氏菌与非布鲁氏菌,检测限为2.56×10-4 ng/μL.在实际样品检测中,LAMP检测方法相对于常规分离鉴定方法的敏感性和特异性均为100％.因此,本研究建立的LAMP检测布鲁氏菌方法具有特异性强、灵敏度高等优点,扩增45 min即可肉眼观察到检测结果,适用于现场和基层检测.