红色红曲菌组蛋白去乙酰化酶MrSir2的原核表达及活性分析

摘要

根据基因组序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)得到了红色红曲菌中组蛋白去乙酰化酶mrsir2基因的完整cDNA序列,其编码序列(codingsequence,CDS)为1539bp,编码512个氨基酸,含有一个SIR2蛋白保守结构域.根据大肠杆菌的密码子的偏好性对mrsir2序列进行优化,优化后的序列与pET-28b载体连接后转入宿主菌E.coli BL21中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件.实验结果表明:在16℃条件下用终浓度为0.25 mM的IPTG诱导培养16h后,目的蛋白MrSir2可溶性表达效果良好.Ni2+柱亲和层析纯化后的MrSir2重组蛋白在SDS-PAGE上显示为一条约75 ku大小的条带,蛋白定量浓度达1.97 mg/mL,经Western blot鉴定为目的蛋白,测定酶活为78.5(OD/min/mg),780μM的二氢香豆素(dihydrocomarin,DHC)对MrSir2蛋白的酶活抑制率为47％.MrSir2蛋白的可溶性表达为全面了解其酶学特征提供了材料,也为体外分析蛋白相互作用奠定了基础.