大肠杆菌植酸酶AppA在毕赤酵母中的高效表达

摘要

本研究全基因合成大肠杆菌B48来源的植酸酶AppA基因,并将它克隆到PHKA载体上,在毕赤酵母GS115中进行分泌表达.为了进一步提高毕赤酵母中植酸酶的表达量,本研究结合信号肽、启动子、基因剂量和蛋白质折叠通量优化的方法,最终将毕赤酵母中植酸酶的活力从329.41U/mL提高到了1892.51U/mL,是初始菌株的5.75倍.初步测定了植酸酶AppA的基本酶学性质,其最适温度和pH分别为60℃和4.5;在60℃处理60 min后,植酸酶活力剩余40％,温度稳定性较差;在pH 6.0～7.0处理6h后,酶活力剩余87％,该酶在弱酸环境中有较好的稳定性;同时研究了二价金属离子对植酸酶活力的影响,Fc2+能够激活植酸酶AppA的活力,而Cu2+、Ni2+、Mn2+等离子通过与植酸形成络合物而抑制植酸酶AppA的活力.该酶在酸性条件下的强稳定性有利于将其应用于食品加工领域.