杜仲抗菌肽EuCHIT1对白色念珠菌的抑菌作用及机制研究

摘要

目的:研究杜仲抗菌肽EuCHIT1对白色念珠菌的抗菌活性及机制.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)扩增EuCHIT1蛋白的编码区,构建原核表达质粒并转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,采用镍亲和色谱法纯化得到可溶性的EuCHIT1;采用二倍最小抑菌浓度(MIC)法稀释EuCHIT1并测定其对白色念珠菌的抑菌圈直径;采用荧光分光光度计和酶标仪分别检测EuCHIT1对白色念珠菌细胞膜的去极化作用及对细胞膜通透性的影响;通过鲎试验动态浊度法和高效液相色谱法分别测定白色念珠菌中(1,3)-β-D-葡聚糖和麦角甾醇含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测EuCHIT1对白色念珠菌感染的SD大鼠肺上皮WTRL1细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.结果:纯化得到的杜仲抗菌肽EuCHIT1相对分子质量为77210,对白色念珠菌MIC值为32μg·mL-1,EuCHIT1质量浓度与抑菌活性之间具有量效关系;EuCHIT1可增加白色念珠菌细胞壁的去极化及通透性,降低白色念珠菌细胞壁(1,3)-β-D-葡聚糖及麦角甾醇的含量,同时EuCHIT1可降低白色念珠菌感染的WTRL1细胞中IL-6及TNF-α水平(P<0.05).结论:EuCHIT1对白色念珠菌具有抑菌作用,主要机制可能是破坏细胞壁,导致细胞膜去极化、通透性增加,并降低白色念珠菌感染的肺上皮细胞IL-6及TNF-α水平.